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大鼠腫瘤壞死因子α（TNF-α)ELISA試劑盒應該怎么用？

α腫瘤壞死因子（TNF α）是一種主要由巨噬細胞和單核細胞產生的促炎細胞因子，并參與正常炎癥反應和免疫反應。α腫瘤壞死因子在許多病理狀態下產生增多，包括敗血癥、惡性腫瘤、心臟衰竭和慢性炎性疾病。在重癥類風濕關節炎患者的血液及關節中都可發現腫瘤壞死因子增多。是迄今為止所發現的直接殺傷腫瘤作用zui強的生物活性因子之一。分為TNF-α，TNF-β兩種，TNF家族除這兩種外還發現約30種。

操作步驟

• 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

• 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
• 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
• 溫育：操作同 3。
• 洗滌：操作同 5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘。
• 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

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